制備型高效液相色譜儀的特點、原理和操作步驟

　　制備型高效液相色譜儀的主要特點：

　　色譜技術(shù)越來越廣泛的應用于制藥，化工和生物工程等領(lǐng)域中樣品的分離和純化。典型的應用如合成原料的純化，標準物質(zhì)的制備，產(chǎn)品的提純等方面。

　　采用步進電機控制，輸液平穩(wěn)，雙柱塞結(jié)構(gòu)，脈動低，性能指標較高，輔以UV系列紫外-可見波長檢測器（配半制備/制備型檢測池）及手動/電動進樣閥及切換閥，即可滿足廣大用戶生產(chǎn)和研究的需要。

　　制備型高效液相色譜儀的原理：

　　儲液器中的流動相被高壓泵打入檢測系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復多次的“吸附-解吸”的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣本濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出檢測結(jié)果。

　　制備型高效液相色譜儀操作步驟：

　　1) 過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜(0.45um)。

　　2) 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。

　　3) 打開HPLC工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。4)進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。

　　4) 有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10 ml/min。

　　5) 調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。

　　6) 設(shè)計走樣方法。點擊file，選取select users and methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊new method。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。

　　7) 進樣和進樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。

　　8) 關(guān)機時，先關(guān)計算機，再關(guān)液相色譜。